Produtos

A mellora da utilización do nitróxeno no gando é importante para garantir unha produción gandeira sostible.Dado que as purinas e as pirimidinas (PP) constitúen unha parte apreciable do nitróxeno do rumen, é esencial unha mellor comprensión da absorción e do metabolismo intermediario do PP.O presente traballo describe o desenvolvemento e validación dun método sensible e específico para a determinación simultánea de 20 purinas (adenina, guanina, guanosina, inosina, 2'-desoxiguanosina, 2'-desoxiinosina, xantina, hipoxantina), pirimidinas (citosina, timina, uracilo, citidina, uridina, timidina, 2'-desoxiuridina) e os seus produtos de degradación (ácido úrico, alantoína, β-alanina, ácido β-ureidopropiónico, ácido β-aminoisobutírico) no plasma sanguíneo das vacas de leite.A técnica baseada en cromatografía líquida de alto rendemento acoplada á espectrometría de masas en tándem de ionización por electrospray (LC-MS/MS) combinouse con patróns de calibración individuais coincidentes con matriz e compostos de referencia estables marcados isotópicamente.A análise cuantitativa foi precedida por un novo procedemento de pretratamento consistente na precipitación, filtración, evaporación e reconstitución de etanol.Investigáronse os parámetros de separación e detección durante a análise LC-MS/MS.Confirmouse que o uso dun modelo de calibración logarítmica en lugar dun modelo de calibración lineal deu como resultado un CV% máis baixo e unha proba de falta de axuste demostrou unha regresión lineal satisfactoria.O método abrangue intervalos de concentración para cada metabolito segundo o das mostras reais, por exemplo, guanina: 0,10-5,0 μmol/L, e alantoína: 120-500 μmol/L.O CV% para os intervalos de cuantificación escollidos foi inferior ao 25%.O método ten boa repetibilidade (CV%≤25%) e precisión intermedia (CV%≤25%) e excelentes recuperacións (91-107%).Todos os metabolitos demostraron unha boa estabilidade a longo prazo e unha boa estabilidade dentro das carreiras (CV% ≤10%).Observáronse diferentes graos de efectos de matriz absoluta no plasma, ouriños e leite.A determinación dos efectos relativos da matriz revelou que o método era axeitado para case todos os metabolitos de PP examinados no plasma extraído dunha arteria e das veas hepáticas portal, hepática e gastroesplénica e, con poucas excepcións, tamén para outras especies como polo, porco, etc. visón, humano e rata.