Produtos

Monogalactopiranósidos de fluoresceína e éster metílico de fluoresceína: síntese, hidrólise enzimática por β-galactosidase biotinilada e determinación do coeficiente de difusión da tradución

Os monoglicósidos de fluoresceína (d-galactopiranósido (FMG) e d-glucopiranósido) e o seu éster metílico (MFMG) preparáronse a partir de acetobromoglicosa/galactosa e éster metílico de fluoresceína con bos rendementos.Realizáronse experimentos de hidrólise enzimática (utilizando β-galactosidasa biotinilada) dos derivados do galacto e calculáronse os parámetros cinéticos.Durante a hidrólise observouse un aumento de 15 a 20 veces da intensidade da fluorescencia.Observouse un aumento lineal da fluorescencia a pouco tempo e a baixa concentración de substrato, o que fai destes compostos sondas útiles e sensibles para as galactosidases.A magnitude do valor da constante de Michaelis-Menten (Km) para MFMG é maior que a da FMG, o que suxire un posible cambio conformacional do substrato fluoroxénico.O valor Km para o β-Gal biotinilado con FMG é inferior ao do encima nativo.Esta observación indica unha maior afinidade polo substrato do encima biotinilado en comparación co encima nativo.Mediron os coeficientes de difusión translacional, tanto para os substratos fluoroxénicos como para os dous produtos, empregando espectroscopia de correlación de fluorescencia.Os coeficientes de difusión translacional dos substratos fluoroxénicos e os produtos da hidrólise enzimática foron similares, no intervalo de 3,5–4,5 × 10–10 m2 s−1.Así, non é tan aparente unha mellora ou un atraso da cinética enzimática debido á diferenza na mobilidade translacional do substrato e do produto.