Produtos

Do mesmo xeito que outros virus de ARN de cadea positiva, os tombusvirus replícanse polo complexo de replicase viral unido á membrana (VRC).O VRC está formado pola ARN polimerase dependente do ARN codificada polo virus p92 (RdRp), a chaperona do ARN p33 viral e varias proteínas do hóspede cooptadas.Para converterse nunha RdRp funcional despois da súa tradución, a proteína de replicación p92 debería incorporarse ao VRC, seguida da súa activación.Previamente demostramos nun ensaio baseado en extractos de levadura sen células que a activación do RdRp do Tomato bushy stunt virus (TBSV) require un(s) factor(s) hóspede soluble.Neste artigo, identificamos a proteína de choque térmico celular 70 (Hsp70) como o factor hóspede cooptado necesario para a activación dun TBSV RdRp recombinante truncado no terminal N.Ademais, o bloqueo da función Hsp70 baseado en pequenas moléculas inhibe a síntese de ARN polo tombusvirus RdRp in vitro.Ademais, mostramos que os fosfolípidos neutros, a saber, a fosfatidiletanolamina (PE) e a fosfatidilcolina (PC ), melloran a activación de RdRp in vitro.Pola contra, o fosfatidilglicerol (PG) mostra un efecto inhibidor forte e dominante na activación de RdRp in vitro.Tamén demostramos que a PE e a PC estimulan a interacción RdRp-viral de ARN máis cadea [(+)ARN], mentres que a PG inhibe a unión do ARN viral ao RdRp.Baseándonos nos roles estimuladores e inhibitorios de varios fosfolípidos na activación de RdRp do tombusvirus, propoñemos que os tombusvirus poidan utilizar a composición lipídica das membranas subcelulares dirixidas para regular o novo ensamblaxe de VRC durante o curso da infección. A ARN polimerase dependente do ARN codificada polo virus. (RdRp), que é responsable de sintetizar a proxenie de ARN viral en células infectadas de varios virus de ARN de cadea positiva, está inicialmente inactivo.É probable que esta estratexia evite a síntese de ARN viral no citosol que levaría rapidamente á indución de respostas antivirais celulares desencadeadas polo ARN.Durante a ensamblaxe do complexo replicase unido á membrana, a RdRp viral actívase a través dun proceso que non se comprende completamente que fai que a RdRp sexa capaz de síntese de ARN.Usando TBSV RdRp, mostramos que a chaperona Hsp70 celular cooptada e os fosfolípidos neutros facilitan a activación de RdRp in vitro.Pola contra, o fosfatidilglicerol (PG) ten un efecto inhibidor dominante na activación RdRp in vitro e na interacción RdRp-ARN viral, o que suxire que o microdominio membranoso que rodea o RdRp afecta moito á súa capacidade para a síntese de ARN.Así, a activación do RdRp viral probablemente depende de múltiples compoñentes do hóspede nas células infectadas.