Produtos

O mecanismo de Mycobacterium smegmatis G (MbsG), unha l-lisina monooxixenase dependente da flavina, investigouse en condicións de estado estacionario e de reacción rápida utilizando efectos de isótopos cinéticos primarios e disolventes, análogos de substrato, pH e efectos de viscosidade do disolvente como sondas mecanicistas.Os resultados suxiren que a l-lisina únese antes do NAD(P)H, o que leva a unha diminución da constante de velocidade para a redución de flavina.A unión da l-lisina non ten ningún efecto sobre a taxa de oxidación da flavina, que ocorre nun proceso dun paso sen a observación dun intermedio C4a-hidroperoxiflavina.Efectos similares determináronse con varios análogos de substrato.A oxidación da flavina é independente do pH mentres que os perfís de pH kcat/Km e kred/KD para NAD(P)H presentan valores de pKa únicos de ∼6,0, cunha actividade crecente a medida que o pH diminúe.A menor pH, a enzima desacoplase, producindo máis peróxido de hidróxeno e superóxido.A transferencia de hidruros limita parcialmente a velocidade a pH neutro e faise máis limitante a pH baixo.Observouse un efecto inverso da viscosidade do disolvente en kcat/Km para NAD(P)H a pH neutro, mentres que un efecto da viscosidade do disolvente normal se observou a pH máis baixo.Xuntos, os resultados indican un mecanismo único no que se produce un cambio conformacional limitante e sensible ao pH na semireacción redutiva, o que afecta a eficiencia da hidroxilación da lisina.