Produtos

A análise dos eventos de fosforilación en todo o proteoma é aínda un reto analítico importante debido á enorme complexidade das redes de fosforilación de proteínas.Neste traballo, avaliamos a complementariedade de Lys-N, Lys-C e tripsina en canto á súa capacidade para contribuír á análise global do fosfoproteoma.Utilizouse unha versión refinada de intercambio catiónico forte de pH baixo para separar eficientemente os péptidos acetilados, fosforilados e non modificados de forma N-terminal.Un total de 5036 fosfopéptidos non redundantes puideron identificarse cunha taxa de descubrimento de falsos <1% a partir de 1 mg de proteína usando unha combinación dos tres encimas.Os nosos datos revelaron que a superposición entre os conxuntos de datos de fosfopéptidos xerados con diferentes proteases era marxinal, mentres que a superposición entre dous conxuntos de datos trípticos xerados de xeito similar resultou ser polo menos 4 veces maior.Deste xeito, o uso paralelo de Lys-N e tripsina permitiu un aumento do 72% no número de fosfopéptidos detectados en comparación con d só coa tripsina, mentres que un experimento de réplica de tripsina só levou a un aumento do 25%.Así, ao centrarnos unicamente nos datos de tripsina e Lys-N, identificamos 4671 fosfopéptidos non redundantes.Unha análise adicional dos sitios detectados mostrou que os conxuntos de datos de Lys-N e tripsina estaban enriquecidos en motivos de fosforilación significativamente diferentes, o que demostra aínda máis que os enfoques multiprotease son moi valiosos nas análises de fosfoproteomas.