Produtos

A topoloxía de membrana do dominio da canle da colicina E1 estudouse mediante a transferencia de enerxía de resonancia de fluorescencia (FRET).O FRET implicou un aminoácido fluorescente codificado xeneticamente (cumarina) como doador e un residuo de cisteína marcado selectivamente ligado con DABMI (4-(dimetilamino)fenilazofenil-4'-maleimida) como aceptor de FRET.O residuo de cumarina fluorescente incorporouse á proteína mediante un par ortogonal de ARNt/aminoacil-ARNt sintetasa que permitiu a incorporación selectiva en calquera sitio dentro do dominio da canle da colicina.Cada variante albergaba unha mutación de parada (TAG) para a incorporación de cumarina e unha mutación de cisteína (TGT) para a unión de DABMI.Seis distancias interhelicals dentro das hélices 1-6 determináronse mediante a análise FRET para os estados solubles e unidos á membrana.Os datos de FRET mostraron grandes cambios nas distancias interhelical entre as hélices 3-6 tras a asociación da membrana, proporcionando unha nova visión da estrutura unida á membrana do dominio da canle.En xeral, as eficiencias interhelical cumarina-DABMI FRET diminuíron coa unión á membrana, baseándose no modelo de paraugas para a canle da colicina.Desenvolveuse un modelo tentativo para o estado pechado do dominio da canle baseado nos datos FRET actuais e publicados previamente.O modelo suxire a disposición circular das hélices 1-7 no sentido horario desde o lado extracelular e a asociación interfacial de membrana das hélices 1, 6, 7 e 10 arredor da horquilla central transmembrana formada polas hélices 8 e 9.