Produtos

A fosforilación de proteínas regula diversas funcións celulares e xoga un papel fundamental no desenvolvemento temperán das plantas.Para complementar e ampliar investigacións previas sobre fosforilación de proteínas en mudas de Arabidopsis, utilizamos un enfoque alternativo que combina a extracción de proteínas en condicións non desnaturalizantes co enriquecemento por cromatografía de afinidade con ións metálicos inmobilizados (IMAC) de fosfoproteínas intactas en extractos empobrecidos en Rubisco, seguido da identificación. utilizando electroforese en xel bidimensional (2-DE) e cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS).A dixestión de tripsina en xel e a análise de puntos de xel seleccionados identificaron 144 péptidos e residuos fosforilados, dos cales só se atoparon 18 fosfopéptidos e 8 fosfositos nas bases de datos de sitios de fosforilación de PhosPhAt 4.0 e P3DB Arabidopsis thaliana.Máis da metade das 82 fosfoproteínas identificadas estiveron implicadas no metabolismo dos carbohidratos, na fotosíntese/respiración ou nos mecanismos de resposta ao estrés oxidativo.O enriquecemento de fosfoproteínas intactas antes de 2-DE e LC-MS/MS parece mellorar a detección de residuos de treonina e tirosina fosforilados en comparación cos métodos que utilizan o enriquecemento a nivel de péptidos, o que suxire que os dous enfoques son algo complementarios en canto á cobertura do sitio de fosforilación.Ao comparar os resultados de plántulas novas cos obtidos previamente para as follas maduras de Arabidopsis identificáronse cinco proteínas que están fosforiladas de forma diferencial nestes tecidos, demostrando o potencial desta técnica para investigar a dinámica da fosforilación de proteínas durante o desenvolvemento da planta.