Produtos

Os nosos estudos anteriores revelaron os seus papeis cruciais tanto nas fases iniciais como nas últimas da infección por KSHV.Neste estudo, investigamos o interactoma de ORF45 usando un panel de anticorpos monoclonais.Ademais das proteínas quinase regulada extracelular (ERK) e p90 ribosomal S6 quinase (RSK) identificadas previamente, atopamos outras proteínas copurificadas, incluídas destacadas de ∼38 kDa e ∼130 kDa.A espectrometría de masas revelou que a proteína de 38 kDa é ORF33 viral e a proteína de 130 kDa é a USP7 celular (protease 7 específica da ubiquitina).Mapeamos o dominio de unión a ORF33 cos 19 aminoácidos carboxilo-terminais altamente conservados (aa) de ORF45 e o dominio de unión a USP7 ao motivo de consenso informado na rexión central de ORF45.Usando a tinción de inmunofluorescencia, observamos a colocalización de ORF45 con ORF33 ou USP7 tanto en condicións de transfectación como en células infectadas con KSHV.Ademais, observamos a relocalización dependente de ORF45 dunha parte de ORF33/USP7 desde o núcleo ata o citoplasma.Descubrimos que ORF45 provocou un aumento na acumulación de proteínas ORF33 que se eliminou se se eliminaba o dominio de unión a ORF33 ou USP7 en ORF45.Ademais, a eliminación do extremo carboxilo conservado de ORF45 no xenoma de KSHV reduciu drasticamente o nivel de proteína ORF33 nas células infectadas por KSHV e aboliu a produción de virións descendentes.En conxunto, os nosos resultados non só revelan novos compoñentes do interactoma ORF45, senón que tamén demostran que as interaccións entre estas proteínas son fundamentais para a replicación lítica do KSHV. O herpesvirus asociado ao sarcoma de Kaposi (KSHV) é o axente causante de varios cancros humanos.O KSHV ORF45 é unha proteína multifuncional que é necesaria para a replicación lítica do KSHV, pero os mecanismos exactos polos que ORF45 realiza as súas funcións críticas non están claros.Os nosos estudos anteriores revelaron que toda a proteína ORF45 nas células existe en complexos de alto peso molecular.Polo tanto, buscamos caracterizar o interactoma de ORF45 para proporcionar información sobre os seus papeis durante a replicación lítica.Usando un panel de anticorpos monoclonais, investigamos o interactoma ORF45 en células infectadas por KSHV.Identificamos dous novos socios de unión de ORF45: a proteína viral ORF33 e a protease celular específica da ubiquitina 7 (USP7).Demostramos ademais que a interacción entre ORF45 e ORF33 é crucial para a produción eficiente de partículas virais do KSHV, o que suxire que a interferencia dirixida con esta interacción pode representar unha estratexia nova para inhibir a replicación lítica do KSHV.