Produtos

O dano oxidativo ás bases do ADN resulta habitualmente na formación de purinas oxidadas, especialmente 7,8-dihidro-8-oxoguanina (8-oxoG) e 7,8-dihidro-8-oxoadenina (8-oxoA), sendo a primeira un ben- lesión mutaxénica coñecida.Dado que o 8-oxoG está facilmente suxeito a unha oxidación adicional en comparación coas bases normais, investigouse in vitro a inserción dunha base durante a síntese de ADN fronte a unha forma oxidada de 8-oxoG.Primeiro tratouse un molde sintético que contén unha única lesión de 8-oxoG con diferentes oxidantes dun electrón ou en condicións de osíxeno singlete e despois someteuse a extensión de cebador catalizada polo fragmento de Klenow exo- (Kf exo-), ADN polimerase alfa de timo de becerro (pol alfa). ) ou ADN polimerase beta humana (pol beta).De acordo cos informes anteriores, dAMP e dCMP insírense selectivamente fronte a 8-oxoG coas tres ADN polimerases.Curiosamente, descubriuse que a oxidación de 8-oxoG induce a inserción de dAMP e dGMP fronte á lesión por Kf exo- con inhibición transitoria da extensión do cebador o que ocorre no sitio da base modificada.Ademais, a lesión constitúe un bloque durante a síntese de ADN por pol alfa e pol beta.Experimentos cun oligonucleótido molde modificado con 8-oxoA mostran que tanto 8-oxoA como unha forma oxidada de 8-oxoA inserción directa de dTMP por Kf exo-.A análise espectrométrica de masas dos oligonucleótidos que conteñen 8-oxoG antes e despois da oxidación con IrCl62 son consistentes coa oxidación principalmente do sitio 8-oxoG, o que orixina a formación dun resto de guanidinohidantoína como produto principal.Non se obtivo evidencia de formación de sitios abásicos.Estes resultados demostran que unha forma oxidada de 8-oxoG, posiblemente a guanidinohidantoína, pode dirixir a mala lectura e a inserción incorrecta dos dNTP durante a síntese de ADN.Se tal proceso ocorrese in vivo, representaría unha lesión mutaxénica puntual que leva a transversións G-->T e G-->C.Non obstante, a forma oxidada correspondente de 8-oxoA mostra principalmente a inserción correcta de T durante a síntese de ADN con Kf exo-.