Produtos

Recentemente informamos de que o nucleótido de pireno insírese preferentemente fronte a un sitio abásico, o 3'-T dun dímero de timina e a maioría das bases non danadas pola ADN polimerase eta de levadura (pol eta).Debido a que o pireno é unha molécula non polar sen capacidade de enlace H, as eficiencias inusualmente altas da inserción de dPMP adscríbense á súa capacidade superior de apilado de bases, e subliñan a importancia do apilamiento de bases na selección de nucleótidos por pol eta.Para investigar o papel da unión H e da xeometría do par de bases na selección de nucleótidos por pol eta, determinamos as eficiencias de inserción dos nucleótidos modificados con bases 2,6-diaminopurina, 2-aminopurina, 6-cloropurina e inosina que fai un número diferente de enlaces H coa base da plantilla dependendo da xeometría do par de bases.O emparellamento de bases Watson-Crick parece xogar un papel importante na selección de análogos de nucleótidos para a inserción fronte a C e T, como se evidencia pola diminución das eficiencias de inserción relativas cunha diminución do número de enlaces H de Watson-Crick e un aumento da o número de interaccións doador-doador e aceptor-aceptor.A selectividade da inserción de nucleótidos é maior fronte ao 5'-T que ao 3'-T do dímero de timina, de acordo con traballos anteriores que suxiren que o 5'-T se mantén máis ríxidamente que o 3'-T.Ademais, a inserción de A fronte ás dúas Ts do dímero parece estar mediada polo emparellamento de bases Watson-Crick e non polo emparellamento de bases de Hoogsteen baseado nas eficiencias de inserción case idénticas de A e 7-deaza-A, o último dos cales carece de H- Capacidade de unión en N7.As eficiencias relativas para a inserción de nucleótidos que poden formar pares de bases Watson-Crick son paralelas ás do fragmento de Klenow, mentres que o fragmento de Klenow discrimina máis fortemente os desaxustes, de acordo coa súa maior selectividade de forma.Estes resultados subliñan a importancia da unión H e da xeometría dos pares de bases de Watson-Crick na selección de nucleótidos tanto pola pol eta como polo fragmento de Klen ow, e o menor papel da selección de forma na inserción por pol eta debido á súa máis aberto e menos. sitio activo restrinxido.