Produtos

As proteínas fosfatases serina/treonina foron descritas en moitas bacterias patóxenas como encimas esenciais implicadas nas vías de transdución de sinais dependentes da fosforilación e frecuentemente asociadas coa virulencia destes organismos.Unha inspección do xenoma de Mycoplasma synoviae revelou a presenza dun xene (prpC) que codifica unha suposta proteína fosfatase da subfamilia de proteínas fosfatase 2C (PP2C).Aquí, informamos dunha caracterización bioquímica completa da fosfatase de M. synoviae (PrpC) e do papel particular dos ións metálicos na relación estrutura-función deste encima.A análise da secuencia de aminoácidos PrpC revelou que todos os residuos implicados no centro metálico dinuclear e os putativos residuos de coordinación do terceiro ión metálico, conservados nas fosfatases PP2C, están presentes en PrpC.A PrpC é unha proteína monomérica capaz de desfosforilar fosfosubstratos coa dependencia dos ións Mn(2+).A análise de estabilidade térmica demostrou a estabilidade do encima a temperaturas suaves e a influencia dos ións Mn(2+) nesta propiedade.A análise por espectrometría de masas suxeriu que tres ións metálicos únense a PrpC, dous dos cales cunha constante aparente de alta afinidade.A análise mutacional dos putativos residuos de coordinación do terceiro metal, Asp122 e Arg164, revelou que estas variantes mostraban unha unión máis débil dos ións manganeso e que ambas mutacións afectaban á actividade da fosfatase PrpC.Segundo estes resultados, PrpC é un membro da proteína fosfatase dependente do metal cunha estabilidade mellorada na forma holo e con Asp122, posiblemente implicado no terceiro sitio de unión ao metal, esencial para a actividade catalítica.